抗體定量的最佳技術是什么？

抗體定量是可重復標記和可靠鑒定各種單克隆抗體類別的重要步驟。它提供了可操作的信息，包括特定應用的最佳稀釋度、如何有效純化特定抗體以及哪些細胞系將產生最有價值的結果。

評估總抗體濃度可能具有挑戰性，因為根據用于純化樣品的技術，只有總計數的一部分包含活性抗原結合抗體。此外，分子科學家可以使用各種實驗方法來進行抗體定量。那么哪種技術最好呢？

抗體終點滴定

滴定用于測量未知溶質的濃度。抗體濃度由終點指示，通常是溶液中跟隨或等于等當點的顏色變化。盡管該技術有其優點，但抗體滴度可能會產生誤導，特別是對于含有高濃度非活性或低親和力抗體的樣品。

酶聯免疫吸附測定 (ELISA)

ELISA 試劑盒在很大程度上取代了濕化學實驗室中的終點滴定，因為它們提供了更高的重現性和總抗體濃度的準確測量。它們的工作原理是抗體-抗原結合，允許使用與報告酶綴合的抗體對特定分析物進行準確定量，報告酶在添加到底物時會進行催化。同樣，反應通常由顏色變化來指示。

傳統的 ELISA 試劑盒通常被認為是臨床診斷應用的金標準，但這種免疫吸附測定有多種形式，包括直接、夾心和競爭 ELISA 試劑盒。

然而，結果的精度通常基于單點插值，單點插值依賴于落在標準曲線內的樣品稀釋度光密度。

通過分光光度法進行抗體定量

分光光度法可以根據 280 nm 處的吸光度快速準確地進行抗體定量。通過 280 nm 處的分光光度吸光度進行抗體定量是一種簡單且經濟有效的方法。它提供了輸入特定消光系數的機會，無需標準曲線或檢測試劑即可獲得準確的測量結果，并可以評估熒光標記抗體的染料摻入情況。此外，用戶還可以使用 Bradford 或 Lowry 等比色測定法進行分光光度抗體定量。