一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測定試劑盒

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內神經、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經組織中較豐富。它作為細胞間及細胞內的信息物質，發(fā)揮信號傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機體的生理、病理過程中起著重要的作用。

測定原理：

NO在體內或水溶液中極易氧化生成NO2—，在酸性條件下，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進一步與萘基乙烯基二胺偶合，產物在550nm處有特征吸收峰，測定其吸光值，可以計算NO含量。

自備實驗用品及儀器：

天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。(用之前60℃加熱震蕩15min)

樣品處理：

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿。10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心15min，取上清置于冰上待測。

3. 體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測定。

測定步驟和操作表：

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至550nm。

2. 操作表

NO含量計算：

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986

1、組織樣品：

（1）按樣本質量計算

NO含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、細胞：

NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷細胞數(shù)量（萬個）

3、其他樣品：

NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷V樣

= 125×（ΔA +0.0103）

V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應中樣品體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

2. 用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線回歸方程為：y= 0.008x - 0.0103，R2= 0. 9986

1、組織樣品：

（1）按樣本重量計算

NO含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr

2、細胞：

NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷細胞數(shù)量（萬個）

3. 其他樣品：

NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V反總÷V樣= 250×（ΔA +0.0103）

V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應中樣品體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為客戶全面解決實驗、生產、開發(fā)需求。公司整合國際與國內資源，加強網絡建設，提高公司內部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測定試劑盒