如何使用 OD600 測(cè)量和因素確定微生物培養(yǎng)物的細(xì)胞密度？

在 600 nm 處測(cè)量光密度 （OD） 是確定細(xì)菌或酵母培養(yǎng)物密度的常用分光光度法，通常在細(xì)菌或酵母生長(zhǎng)階段。OD600 測(cè)量是一種快速便捷的測(cè)定細(xì)胞密度的方法，這些細(xì)胞通常是單細(xì)胞的、太小且運(yùn)動(dòng)的，無(wú)法使用典型的基于圖像的顯微方法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

可以建立與特定細(xì)胞類(lèi)型的預(yù)期密度相匹配的目標(biāo) OD 600 值，以簡(jiǎn)化相同樣品類(lèi)型的未來(lái)測(cè)量。這是微生物實(shí)驗(yàn)室在細(xì)胞生長(zhǎng)的各個(gè)階段檢查和維護(hù)樣品的一種簡(jiǎn)單方法，包括細(xì)胞周期的滯后期、對(duì)數(shù)期（也稱(chēng)為指數(shù)期）和穩(wěn)定期。

了解 OD 測(cè)量的當(dāng)前限制

雖然分光光度計(jì)是進(jìn)行這種測(cè)量的好工具，但 OD 實(shí)際上是光散射的量度，而不是真實(shí)吸光度的量度。因此，測(cè)得的 OD 受細(xì)胞類(lèi)型的大小和形狀、樣品活力或生長(zhǎng)期、分光光度計(jì)的光學(xué)配置以及光譜儀的線(xiàn)性范圍等因素的影響。

為了考慮影響測(cè)量 OD 的因素，建議根據(jù)生長(zhǎng)曲線(xiàn)憑經(jīng)驗(yàn)確定目標(biāo) OD 600 值。通過(guò)將測(cè)得的 OD 600 值與每種細(xì)胞類(lèi)型的集落形成單位 （CFU） 板計(jì)數(shù)相關(guān)聯(lián)來(lái)創(chuàng)建生長(zhǎng)曲線(xiàn)。

一旦建立了生長(zhǎng)曲線(xiàn)并確定了細(xì)胞類(lèi)型的目標(biāo) OD，就可以使用測(cè)量模式或分光光度計(jì)之間的轉(zhuǎn)換因子來(lái)使用不同的光學(xué)配置。例如，DS-11 系列分光光度計(jì)超微量模式采用與 DS-11 系列比色皿模式不同的光學(xué)配置，因此在兩種模式下測(cè)量的樣品將檢測(cè)不同的光散射。

在這種情況下以及使用不同品牌或型號(hào)的分光光度計(jì)時(shí)，轉(zhuǎn)換因子很有用。該系數(shù)的計(jì)算方式如下所示：

在上述情況下，在 DS-11 系列微量和比色皿模式之間切換時(shí)，計(jì)算轉(zhuǎn)換因子特別有用。對(duì)于測(cè)量的光程，基于比色皿的儀器的線(xiàn)性范圍通常在上限限制為 1.5 吸光度單位 （AU） 左右。這可能不夠高，無(wú)法覆蓋給定樣品的生長(zhǎng)周期，并且可能與生長(zhǎng)不成線(xiàn)性關(guān)系。

微量模式使用較短的光程，因此可以更準(zhǔn)確地測(cè)量密度較大的樣品，而無(wú)需稀釋。這樣可以更好地跟蹤指數(shù)生長(zhǎng)、子細(xì)胞的產(chǎn)生和整體細(xì)胞分裂，尤其是在各種環(huán)境條件下生長(zhǎng)的細(xì)菌種群和細(xì)菌菌落中。