α-淀粉酶活性的測定

所需材料

1.KPO4-NaCl緩沖液；25℃時含0.01 M氯化鈉的0.1 M pH 6.9。將8.71克K2HPO4溶解在500毫升H2O中。用0.1 M磷酸二氫鉀（6.8克/500毫升H2O）滴定至pH 6.9。添加氯化鈉至0.01 M .小心！在下面的步驟2和3中使用通風罩和攪拌器/加熱板。

2.底物溶液；1%可溶性淀粉。通過加熱攪拌將1克溶解在80毫升H2O中至約。90°C，冷卻并將體積調節至100 ml。

3.顯色試劑；44.0毫米3，5-二硝基水楊酸。通過加熱并攪拌ca，將1克3，5 DNSA溶解在80毫升0.5 M NaOH中。加入30克酒石酸氫鈉，攪拌直至溶解。冷卻至室溫，用H2O定容至100 ml。儲存在琥珀瓶中。室溫下穩定30天。

4.麥芽糖標準品；0.01 M .將36 mg麥芽糖一水合物溶解在10 ml KPO4-NaCl緩沖液中。

5.酶溶液。用KPO4-NaCl緩沖液將淀粉酶稀釋至0.05毫克/毫升。

6.在適合于100°c加熱的試管中制備以下稀釋液。
 

管	磷酸亞鐵鋰氯化鈉	淀粉酶	毫升	微米	毫升H20
1次測試	0.50	0.01毫升	-----	-----	0.40
2標準	0.5	----------	0.05	0.5	0.45

將所有試管置于25°c下。在0點時，向試管1和6中添加0.5 ml底物溶液，并孵育2分鐘。通過添加1.0毫升顯色試劑來停止反應。在溫度塊中以100°加熱所有試管10分鐘。冷卻至室溫，向每個試管中加入2.5毫升H2O。讓試管在室溫下靜置10分鐘。

7.在540 nm處讀取Abs與空白的對比。繪制Abs與麥芽糖μ摩爾的關系圖。確定540/μM麥芽糖的斜率。

8.計算比活度，即每毫克淀粉酶在pH 6.9時每分鐘釋放的麥芽糖微米25°C