CleanPlex ® UMI 技術——用于檢測低頻等位基因的基于擴增子的分子條形碼

 CleanPlex ®  UMI 技術是一種多重 PCR 或基于擴增子的 NGS 靶向測序技術，用于精確的腫瘤 DNA 分析。它具有高度先進的專有引物設計算法和 創新的分子條形碼化學。它們共同使得 CleanPlex UMI 即用型和定制 NGS 面板能夠自信地檢測游離 DNA (cfDNA) 中的低頻變異（循環腫瘤 DNA - ctDNA）。

CleanPlex UMI 目標富集工作流程

CleanPlex UMI 基于多重 PCR 的目標富集工作流程。 CleanPlex UMI 技術允許輕松快速地準備分子條形碼和目標富集的 NGS 文庫用于測序。 

超快速且簡單的工作流程

CleanPlex UMI 技術具有簡單的工作流程，可在 3.5 小時內完成，并且只需要 85 分鐘的動手時間。可以快速制備分子條形碼和目標富集的 NGS 文庫，以便更快地獲得結果。

CleanPlex UMI 技術具有的分子標識符

CleanPlex UMI 目標文庫制備方案。 CleanPlex UMI 協議涉及 3 個簡單步驟，每個步驟包括熱循環或孵育反應，然后使用磁珠進行文庫純化。簡化的方案僅需 3.5 小時即可完成。完成該協議所需的儀器是熱循環儀。

CleanPlex UMI 技術使用專有的多重 PCR 分子條形碼化學來標記每個 DNA 分子。整合的分子標識符 (UMI) 可以糾正測序數據中的 PCR 和測序錯誤，從而提高變異檢測的靈敏度和特異性。

CleanPlex UMI（分子條形碼）化學

CleanPlex UMI 分子條形碼化學。 CleanPlex UMI 工作流程的第一步是多重 PCR 反應，該反應使用 UMI 標記的目標特異性引物對感興趣的目標進行條形碼和擴增。第二步是生化反應，通過去除攜帶冗余和部分 UMI 的 PCR 產物來解析正確的 UMI。最后一步是使用 CleanPlex 雙索引 PCR 引物的擴增反應，可確保高精度樣品解復用，以擴增樣品級索引并將其添加到 NGS 文庫中。建議使用CleanMag ®磁珠進行文庫純化。

CleanPlex UMI 技術結合了分子標識符 (UMI)，能夠可靠地檢測低頻變異。 可以根據測序數據構建共有序列，以在變體調用之前消除 PCR 和測序錯誤。因此，可以準確地將真正的突變與背景噪聲區分開來。借助 CleanPlex UMI 技術，只需 30 ng 的輸入 DNA，即可高特異性地檢測低于 0.5% 等位基因頻率的低頻變異。

UMI 支持準確的變體調用。 使用 CleanPlex UMI 肺癌面板，使用 50 ng 次要等位基因頻率 (MAF) 為 0.1% 的 SeraCare Seraseq™ ctDNA Complete™ 突變混合物來制備靶向 NGS 文庫，該文庫涵蓋了參考材料中存在的 13 個突變。使用和不使用 UMI 來分析所得數據。底部面板顯示，啟用 UMI 的糾錯可顯著減少誤報，從而將真正的突變（橙色圓圈和三角形）與背景噪聲（白色圓圈）區分開來。