AimPlex™ 多重檢測(cè)技術(shù)怎么運(yùn)行的？

AimPlex™ 多重檢測(cè)技術(shù)利用按大小和不同熒光強(qiáng)度水平區(qū)分的多個(gè)珠群。 AimPlex 技術(shù)具有 4 和 5 微米兩種尺寸的珠子，每種珠子尺寸（4S 和 5S）有 12 個(gè)熒光強(qiáng)度級(jí)別，只需15 µL 樣品即可在一次反應(yīng)中同時(shí)測(cè)量多達(dá) 24 種分析物。使用配備藍(lán)色 488nm 和紅色 635nm 激光器或僅配備 488nm 激光器的標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞儀測(cè)定反應(yīng)中的珠群。珠分類染料的最大發(fā)射波長(zhǎng)為 700 nm。
 
與夾心 ELISA 的原理類似，每個(gè)珠群與特定的捕獲抗體結(jié)合，捕獲樣品中的目標(biāo)蛋白質(zhì)，例如細(xì)胞因子。通過(guò)針對(duì)蛋白質(zhì)二級(jí)表位的生物素化抗體檢測(cè)捕獲的分析物的量，然后進(jìn)行鏈霉親和素-R-藻紅蛋白處理。在配備有 488nm 激光器的流式細(xì)胞儀上對(duì)珠子上的 R-藻紅蛋白的熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量，并使用 PE 通道檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)量。通過(guò)將熒光信號(hào)與由已知濃度的蛋白質(zhì)分析物的系列稀釋產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線的信號(hào)進(jìn)行比較，可以獲得樣品中感興趣的蛋白質(zhì)的濃度。
 
測(cè)定程序包括 60 分鐘抗原和捕獲抗體綴合珠孵育步驟、30 分鐘生物素化檢測(cè)孵育步驟和 20 分鐘鏈霉親和素-PE 孵育步驟。每次孵育步驟后通過(guò)流通式過(guò)濾器底部微孔板清洗珠子可提供最高的信噪比。