laebio檢測試劑盒:Sumoylation Control Kits簡述

該檢測試劑盒包含用于常規檢測蘇酰化活性的試劑。包含蘇酰化標記（人拓撲異構酶 I 蛋白），以便清晰地檢測反應。該測定已被證明適用于粗提物。強烈建議人 EI，活性 (Cat# P001；P006)、人 E II，活性 (Cat# P002；P011) 和人 SUMO I，活性 (Cat# P003；P012) 與該試劑盒一起使用。

K007 套件包含：

• SAE I 和 SAE II（人類 EI）（目錄號 P006）

• UBC9（人類 E II）（目錄號 P011）

• SUMO I（主動形式）。 （目錄號 P012）

• 人類 DNA 拓撲異構酶 I 片段。 （目錄號 B007）

• 抗拓撲異構酶 I 抗體。 （目錄號 AP006）（凍干抗體應在使用前用 100 ul H ₂ O 復溶。）

• 10X 蘇酰化反應緩沖液。 （目錄號 B006）（10x 緩沖液含有 200 mM Hepes pH 7.5、50 mM MgCl ₂和 20 mM ATP。）

上述試劑適用于50次蘇酰化反應。

測定條件：
蘇酰化測定在含有20mM Hepes pH 7.5、5mM MgCl ₂、2mM ATP的反應緩沖液中以20ul的終體積進行。我們建議添加新鮮的 2mM ATP 以確保提供足夠的能量。

拓撲異構酶 I 蘇酰化控制方案：

1. 添加 2 ul 50 kd 拓撲異構酶 I 片段（目錄號 B007）作為每個反應的底物。

2. 在每個反應中，首先將 2 ul E2 添加到底物中，然后添加 2 ul Sumo-1、2ul 10x 反應緩沖液（目錄號 B006）、2ul E1 和 2 ul 20 mM ATP。最后，添加 H ₂ O 使總體積達到 20 ul 。

3. LAE SUMO化蛋白的最佳反應濃度如下：      對照測定的推薦條件是37 ^℃，30~60分鐘。
   
   

• EI：7.5微克/毫升

• E II：50微克/毫升

• SUMO-1：50微克/毫升

4. 使用 10 ml 中提供的拓撲異構酶 I 抗體（目錄號 AP006）稀釋 1000 倍進行蛋白質印跡。應檢測四個主要的SUMO化條帶。

使用 Topo-I 抗體（目錄號 AP006）對蘇酰化 50 Kd Topo-I 蛋白（目錄號 B007）進行蛋白質印跡（12.5% 凝膠）。泳道 1：sumoylated 50Kd Topo-I 片段；泳道 2：未蘇酰化的 50Kd Topo-I 片段。

Topo-I 抗體 ( Cat#AP006)可以檢測到至少四個主要的蘇酰化 Topo-I 片段 。

蘇酰化方案：

1. 準備合適的純化底物蛋白。

2. 在每個反應中，首先將 2 ul E2 添加到底物中，然后添加 2 ul Sumo-1、2 ul 10 x 反應緩沖液、2 ul E1 和 2 ul 20 mM ATP。最后，添加 H ₂ O 使最終體積達到 20 ul。

3. LAE蛋白的最佳反應濃度如下：

• EI：7.5微克/毫升

• E II：50微克/毫升

• SUMO-1：50微克/毫升

運輸/儲存：
該套件隨干冰一起運輸，應儲存在 -70 ^o C 或更低的溫度下。  

法律考慮：僅供研究使用。

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