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      Duolink® PLA熒光實驗方案

      更新時間:2023-11-28      點擊次數:1413

      Duolink® PLA試劑

      有關具體的產品建議,請參閱Duolink® PLA產品選擇指南。簡單來說,要運行用于熒光檢測的Duolink® PLP實驗,需要以下Duolink® PLA產品:

      一、Duolink® PLA探針(一種PLUS和一種來自不同物種的MINUS,與您的一抗宿主物種相匹配)。每個試劑盒包括:

      1.PLA探針(5x— PLUS/MINUS,取決于產品;

      2.封閉溶液用于在孵育抗體前封閉樣品;

      3.抗體稀釋劑用于稀釋PLA探針,而且如果需要,用于稀釋一抗。

      注意:將試劑盒的所有組分存放在4°C溫度下。

      注意:如果需要,可用Duolink® PLA試劑盒生成定制的PLA探針。

      二、Duolink®熒光檢測試劑(可選擇綠色、橙色、紅色等)

      每個試劑盒包括:

      1.連接原液(5x稀釋以制備1x連接緩沖液

      2.連接酶 (1 U/μL) – 添加以制備連接溶液

      3.擴增原液 (5x) – 稀釋以制備1x擴增緩沖液

      4.聚合酶 (10 U/μL) - 添加以制備擴增溶液

      注意:將所有組分存放在-20°C溫度下。

      三、熒光用洗滌緩沖液。

      四、含DAPIDuolin用于載玻片,儲存在2-8°C)或者細胞核染色劑和抗淬滅劑(用于微孔板,儲存在-20°C


      其他材料!

      1.檢測目標蛋白質的一抗。當與Duolink® PLA探針一起使用時,必須在小鼠、兔子或山羊中飼養。

      2.高純度純水(無菌過濾,Milli-Q®或類似水質)

      3.載玻片上的樣品(細胞或組織),已經過固定、恢復和透化方面的預處理。關于下列主題的相關建議和詳細信息,請參閱如何優化Duolink®鄰近連接測定:

      1.實驗設計和對照

      2.選擇一抗和優化

      3.樣品處理

      設備

      1.熒光顯微鏡,帶有適當的濾光片、照相機和圖像采集軟件

      2.37°C培養箱

      3.水平搖床

      4.加熱濕度箱或微孔板傳熱座

      5.疏水筆,用于給反應區域劃界

      6.冰塊(用于酶)

      7.染色罐

      8.鑷子

      9.移液器和吸頭(1 μl1000 μl

      10.與熒光顯微鏡兼容的蓋玻片


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