Duolink® PLA的實驗對照

Duolink® PLA 結果為蛋白質事件（表達、相互作用或修飾）提供了相對定量。因此，加入技術對照組，以及在可能的情況下加入生物對照組，是十分重要的。

技術對照：

每個 Duolink® PLA 實驗中應該包含兩個技術對照組。這包括：

1.分別省略一種一抗

用于檢測每種一抗的非特異性結合

有助于確定最佳一抗效價

2.省略所有一抗

用于檢測系統中 Duolink® PLA 探針的非特異性結合

生物對照：

除了技術對照外，強烈建議使用生物對照。陽性和陰性生物對照均可提供有價值的信息。

1.陽性對照：

用含已知蛋白表達、相互作用或修飾的單獨樣本來測試試劑

可誘導系統（如生長因子刺激、熱休克等）的使用將提供Duolink® PLA信號的生物學相關性

2.陰性對照：

使用不表達蛋白質靶標的樣品（例如敲除、沉默等）將提供一抗特異性的信息

使用不相關抗體（例如同種型 IgG、非相互作用蛋白的抗體等）將提供關于Duolink® PLA 探針特異性的信息

使用阻止蛋白質相互作用或修飾的抑制劑將提供 Duolink® PLA 信號的生物學相關性  

優化 Duolink® 鄰位連接實驗的補充！

封閉液和抗體稀釋劑：

Duolink®封閉液和抗體稀釋劑含有 Duolink® PLA 探針（PLUS和MINUS）。這些溶液已進行優化，可與Duolink® PLA試劑配合使用，以最大限度地減少抗體和檢測寡核苷酸的非特異性結合。然而，在這些條件下，必須驗證您的一抗與目標蛋白靶標的特異性結合。應通過 Duolink® PLA 單一識別實驗，或者 IF 或 IHC 來分別檢測每種一抗。

如果您之前已經確定了用于IF 或 IHC 染色的封閉液和/或抗體稀釋劑，則這些溶液很可能也可用于 Duolink® PLA。在這些溶液中不應該使用來自與您的一抗相同物種的同種型 IgG 作為封閉液，因為這將導致來自 Duolink® PLA 探針的錯誤信號。