Phusion® 高保真 DNA 聚合酶說明書

Phusion® 高保真 DNA 聚合酶

用于高速、高性能 PCR。Thermo Scientific® Phusion 高保真 DNA 聚合酶由 New England Biolabs 制造并進行質(zhì)量控制，具有高保真度和強大的性能。

保真度比 Taq 高 50 倍
穩(wěn)健的反應(yīng) - 以最少的優(yōu)化獲得最大成功
提供多種緩沖液，可針對不同 DNA 模板定制反應(yīng)設(shè)置

高保真 DNA 聚合酶對于擴增后 DNA 序列需要正確的應(yīng)用非常重要。其結(jié)構(gòu)是一種與持續(xù)增強結(jié)構(gòu)域融合的新型火球菌樣酶，可提高保真度和速度。Phusion DNA 聚合酶是克隆的理想選擇，可用于長或困難的擴增子。Phusion 的錯誤率比 Taq DNA 聚合酶低 50 倍以上，比激烈火球菌 DNA 聚合酶低 6 倍 (1)，是目前最準確的熱穩(wěn)定聚合酶之一。Phusion DNA 聚合酶具有 5′→ 3′ 聚合酶活性、3′→ 5′ 核酸外切酶活性，可產(chǎn)生平端產(chǎn)物。

Phusion DNA 聚合酶配有標準 5X Phusion HF 緩沖液以及 5X Phusion GC 緩沖液，可用于復雜或富含 GC 的模板。這些緩沖液均含有 MgCl2（最終 [1X] 反應(yīng)濃度為 1.5 mM）。還可以使用提供的 DMSO 或 MgCl2 溶液來優(yōu)化反應(yīng)。

使用經(jīng) Frey & Suppman, 1995 修改的基于 lacI 的方法進行保真度測定。

使用不同的聚合酶從 50 ng Jurkat gDNA 中擴增出 3.8 kb 片段。反應(yīng)按照制造商推薦的條件進行。指示延長時間（以分鐘為單位）。梯子 L 是 1 kb DNA 梯子 (NEB# N3232)。

單位定義

One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10 nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 74°C.

貯存溶液

20 mM Tris-HCl
100 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50% Glycerol
1X stabilizers
pH 7.4 @ 25°C

熱失活

否

5' - 3' 核酸外切酶

No

3' - 5' 核酸外切酶

Yes

單位活性檢測條件

25 mM TAPS-HCl (pH 9.3 @ 25°C), 50 mM KCl, 2 mM MgCl², 1 mM b-mercaptoethanol, 200 µM dNTPs including [³H]-dTTP and 15 nM primed M13 DNA.

特點
穩(wěn)健的反應(yīng) – 以最少的優(yōu)化獲得最大的成功
高的保真度 – 比 Taq 高 50 倍。
高速 – 顯著縮短延伸時間（比 Pfu 快 10 倍）
高產(chǎn)量 – 使用最少量的酶提高產(chǎn)物產(chǎn)量 多功能
– 可用于常規(guī) PCR 以及長或困難的模板
應(yīng)用特性
PCR
克隆
長或困難的擴增
高通量聚合酶鏈式反應(yīng)