如何用納米金標記核苷酸？

納米探針在制備用于標記DNA，RNA和其他核酸的金標記試劑方面具有持續的研究興趣。Monoamino Nanogold，Monomaleimido Nanogold和Mono-sulfo-NHS-Nanogold®®®都可用于標記核苷酸。對納米金®試劑的特定反應性必須首先摻入所需標記位點的核苷酸中。這可以通過三種方式實現：

5'-用單氨基納米金®標記（適用于所有寡核苷酸）:

首先，酶促去磷酸化5'末端。使用CDI（N，N'-羰基二咪唑）或EDC（1-乙基-3，3'-二甲氨基丙基碳化二亞胺）與磺基-NHS或咪唑將殘留的磷酸基轉化為反應性酯。將活化酯與單氨基納米金®反應;它將通過酰胺鍵偶聯，如 方案 1:

5'末端的硫醇化和單馬來酰亞胺基納米金®標記（適用于所有寡核苷酸）:

如上所述，用 CDI 或 EDC 去磷酸化和激活。如 Chu（參考文獻 1）所述，與 2,2'-二硫雙（乙胺）二鹽suan鹽（胱胺二鹽suan鹽）反應，或者用咪唑、胱胺和 EDC（參考文獻 2）處理 5'-磷酸化核苷酸。用 0.1 M DTT 還原并與過量的 DTT 嚴格分離以生成游離硫醇，如 Ghosh 所述（參考文獻 2）。如方案 2所示，用 Monomaleimido Nanogold® 標記生成的硫醇化寡核苷酸：

通過取代亞磷酰胺引入的反應性基團標記（用于合成寡核苷酸）:

使用市售的改性亞磷酰胺試劑在特定堿上引入受保護的胺或受保護的硫醇（這些試劑可從以下位置獲得 克隆泰克 或 格倫研究).然后根據替代亞磷酰胺的推薦方案脫保護，并用單馬來酰亞胺納米金或單磺基-NHS-納米金®®標記。

如果這些方法不適用于您的系統，您可以使用 帶正電荷的納米金®.該試劑用多種胺官能化，在中性或酸性pH下帶正電荷。然后，它將靜電結合到寡核苷酸帶負電荷的磷酸基團。

或者，通過核苷酸的生物素化或在合成過程中摻入生物素修飾的亞磷酰胺，將半抗原（如生物素）引入寡核苷酸探針中。然后使用 納米金®抗生物素（IgG或Fab'）或鏈霉親和素.我們希望一旦其中一個抗體供應商開始以更實惠的價格攜帶未標記抗體，就立即推出金標記的抗digoxigenin。